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Q-PCR實驗中熔解曲線異常
解決方案:
1.優化引物設計,提高退火溫度。
2.使用探針法減少非特異性擴增。
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Q-PCR實驗中Ct值過高
解決方案:
1.增加模板量或優化反應條件。
2.檢查引物效率和特異性
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Q-PCR實驗中污染問題
解決方案:嚴格分區操作(樣品準備區、反應配制區、擴增區),避免使用污染的移液槍和試劑。
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Q-PCR實驗中RNA反轉錄問題
解決方案:
1.使用無RNase的試劑和耗材。
2.優化反轉錄反應條件。
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Q-PCR實驗中標準曲線線性差
解決方案:
1.重新稀釋模板,確保梯度準確。
2.檢查引物效率和反應條件。
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Q-PCR實驗中熒光信號弱
解決方案:檢查熒光染料和探針質量。或增加探針\染料濃度。
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Q-PCR實驗中重復性差
解決方案:確保加樣準確,混勻反應體系。
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Q-PCR實驗中擴增效率低
解決方案:重新設計引物或優化反應體系(如Mg2?濃度)。
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Q-PCR實驗中非特異性擴增
解決方案:優化引物設計,提高退火溫度?;蚴褂锰结樂ǎㄈ鏣aqMan)提高特異性。
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Q-PCR實驗中無擴增信號
可能原因:
1.模板濃度過低或降解。
2.引物設計不佳或反應條件不適。